试样混合物中各组分在色谱分离柱的两相间不断进行着的分配过程，其中一向固定不动。

　　当流动相中携带的试样混合物流经固定相时，各组分与固定相发生相互作用，由于试样混合物中各组分在性质和结构上的差异仪器分析，与固定相之间产生的作用力大小不同，随着流动想的移动，试样混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由分离柱中流出。

　　色谱分析法的分类：流动相不同—气相色谱、液相、超临界流体；（气）分离柱不同-填充柱气相色谱、毛细管；（气）固定相不同-气固色谱、气液色谱。（液）分离柱不同-分配色谱、离子交换、离子、凝胶。

　　色谱分析法的作用：分离效率高、灵敏度高、分析速度快、应用范围广、样品用量少、选择性好、多组分同时分析。定性能力差。

　　保留值：用于表征式样组分被固定相滞留程度的参数。保留时间（tR）进样到柱后出现浓度极大值。死时间（tM）调整保留时间（t’R）组分在固定相中的时间

　　气固（液固）色谱的固定相：多孔性的固体吸附剂颗粒-——固体吸附剂对式样中各组分的吸附能力不同。 气固色谱的分离原理：吸附与脱附的不断重复过程

　　气液（液液）色谱的固定相：由担体和固定液组成—— 固定液对式样中各组分的溶解能力的不同。 气液色谱的分离原理：气液（液液）两相间的反复多次分配过程

　　分配比：k=组分在固定相中的质量/组分在流动相中的质量=ms/mMk=K/β

　　塔板理论：（理论塔板数）n=L/H（理论塔板高度—为使组分在柱内两相间达到一次分配平衡所需要的柱长）当色谱柱长L固定时，n值越大，或H值越小，柱效率越高，分离能力越强

　　速率理论：H=A+B/u+Cu （涡流扩散、分子扩散、传质阻力（流动相和固定相传质阻力））

　　涡流扩散项的大小与固定相的平均颗粒直径和填充是否均匀有关——固定相颗粒越小，填充越均匀，A项越小，柱效越高，色谱峰较窄。

　　分子扩散与组分所通过的路径的弯曲程度和扩散系数有关——流速越小扩散越严重，气相色谱的分子扩散大于液相色谱。

　　减小固定相粒度，选择相对分子质量小的气体做载体，减小液膜厚度，可降低传质阻力。

　　载气系统1.气源（氢气、氮气、氦气）2.净化干燥管：除去载气中的微量水，有机物等杂质。3.稳压阀控制（保持载气流速稳定）

　　分离柱：材质，不锈钢（3-6mm）（60-80/80-100目）色谱固定相填料

　　检测系统：光谱、浓度——热导检测器（TCD）、专属、质量——氢火焰离子检测器（FID）、电子捕获器（ECD）、火焰光度检测器、热离子检测器。

　　气固色谱固定相：活性炭、活性氧化铝（O2、N2、CO、CH4、C2H6、C2H4）除CO2、

　　担体：用来支撑固定液，多孔性固体颗粒，比表面积较大孔径分布均匀，表面无吸附性或吸附性很弱，与被分离组分不起反应具有较高的热稳定性和机械强度（硅藻土型）

　　液相色谱仪结构：梯度淋洗系统、高压输液泵、流量控制系统、进样系统、分离柱、检测系统

　　高压输液泵：恒流泵（机械往复柱塞泵、机械注射泵）：可在工作中保持给出稳定的流量，流量不随系统阻力变化。

　　恒压泵：使输出的流动相压力稳定，流量随系统阻力改变，造成组分保留时间的重现性差。

　　分离柱：直形不锈钢管、内径1-6mm，柱长5-40cm，减小填料粒度（5-10um），和柱径提高柱效。

　　梯度淋洗装置：改善分离、调节出峰时间的目的，可通过改变流动相组成和极性的方法达到，既流动相组成的改变可使溶质在两相中的分配系数改变。工作状态下改变流动相组成需要采用梯度淋洗装置（内梯度、外梯度：利用一台高压泵，通过比例调解阀将不同比例溶剂按一定比例抽入混合器中。）

　　紫外检测器原理：试样组分对特定波长的紫外光具有选择性吸收，吸光度与试样组分浓度之间的定量关系符合朗伯-比尔定律。由光源发射的光通过测量池时被组分吸收，投射光中包含了组分对各波长吸收的信息，分光后投射到二极管阵列上。（缺点：对无紫外-可见吸收的组分不响应，而对紫外光吸收较大的溶剂，如苯不能使光透过，则无法作为流动相使用，使流动相的选择收到限制。

　　示差折光检测器原理：连续检测参比池和试样池中流动相之间的折光指数差值，该值与流动相中的组分浓度成正比。（偏转式，反射式，干涉式）

　　荧光检测器原理：仅对某些有荧光特性的物质有响应。在一定条件下，荧光强度与流动相中的物质浓度成正比。

　　液固吸附色谱：固定相颗粒的粒度较小（5-10un的硅胶吸附剂）吸附平衡常数越大，表明该溶质分子在固定相上被吸附的越多，吸附作用越强，色谱行为表现在，该组分的保留时间越长，分配系数越大。（直线型-正常峰、凸线型-拖尾峰、凹线型-前伸峰）

　　液液分配色谱：正相分配色谱：固定相的极性＞流动相的极性，极性小的组分先流出。

　　化学键合相色谱：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶表面的游离硅羟基上。

　　离子交换色谱：使用的固定相为阴（阳）离子交换树脂，属键合固定相。采用苯乙烯-二乙烯苯共聚微球作为担体，在苯环上键合阳离子交换基团（磺酸基）或阴离子交换基团（季胺基）

　　排阻色谱：利用凝胶中孔径大小的不同，当溶质通过时，小分子可以通过所有孔径而形成全渗透，色谱保留时间最长；大分子由于不能进入孔径而被全部排阻，色谱保留时间短；体积在小分子和大分子之间的分子则仅能进入部分合适的孔径，在两个之间流出。

　　亲和色谱：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特性亲和力，进行选择性分离。

　　分配色谱固定相：全多孔型、化学键合。液固吸附：硅胶、氧化铝、分子筛。离子交换：离子交换树脂、离子交换键合。空间排阻：软质凝胶、半硬质凝胶、硬质凝胶

　　流动相的选择：溶剂的极性大小：水＞甲酰胺＞乙青＞甲醇＞乙醇＞丙醇＞丙酮＞二氧六环＞四氢呋喃＞甲乙酮＞正丁醇＞乙酸乙酯＞＞异丙醚＞二氯甲烷＞氯仿＞溴乙烷＞苯＞四氯化碳＞二硫化碳＞环乙烷＞乙烷＞煤油

　　? 紫外光谱：是一种波长范围在200-400nm之间，根据电子跃迁方式的差异来鉴别物

　　? 吸收光谱：是由于光与分子发生相互作用，分子能吸收光能从低能级跃迁到高能级

　　? 发散光谱：是由于分子有高能级回复到低能级释放出光能形成的光谱（荧光）

　　? 散射光谱：是由于当光被散射时，随着分子内能级的跃迁，散射光频率发生变化形

　　? 发色团：具有双键结构，能对紫外或可见光有吸收作用，产生 和 跃迁的集团

　　? 助色团：本身不具有生色作用，但与发色集团相连时，通过非键电子的分配，扩散

　　了发色团的共轭效应，从而影响发色团的吸收波长，增大了其吸收系数的一类集团。

　　I0入射光强 I透射光强 T透光率 ε吸光系数 C溶液浓度 l样品槽厚度

　　n--σ* 含O、N、S和卤素等杂原子的饱和烃的衍生物发生此类跃迁 150-250nm

　　n—π* 分子中孤对电子和π键同时存在时，大于200nm，吸收系数小，为10-100

　　? 光谱分析法：当光照射到物体上时，电磁波的电矢量就会与被照射物体的原子核分子发

　　生相互作用引起被照体内分子运动状态发生变化，并产生特征能级之间跃迁分析方法。

　　1）反应分子中价电子能级跃迁情况，主要用于共轭体系（共轭烯烃和不饱和羰基化合

　　? 极性溶液：使n—π*跃迁向低波移，称为蓝移; π—π*向高波移，红移

　　? 红外光谱：是由于分子内原子核之间振动和转动能级的跃迁而形成的吸收光谱。 ? 伸缩振动：原子沿键轴方向伸缩使键长发生变化的振动，用符号ν表示

　　? 弯曲振动：原子垂直于价键方向振动，使得分子内键角发生变化的振动，用ν表示 ? 基频吸收：处于基态的具有红外活性的分子振动，被红外辐射激发后，跃迁到第一

　　? 倍频吸收：非线性谐振的分子振动时，除基频跃迁外，发生由基态到第二或第三激

　　b. 谱带形状：研究分子内是否存在缔合以及分子的对称性旋转异构、互变异构 c. 谱带强度：与分子振动时偶极矩的变化率有关，定量分析的基础

　　? 荧光：当电子从最低单线时，发射出光子，陈称为荧光 ? 磷光：当电子从最低单线进行系间窜越到最低激发三线回到单

　　? 拉曼散射：当光透过样品被散射时，光子与样品分子之间发生非弹性碰撞，有能量

　　? 瑞利散射：当光透过样品被散射时，光子与样品分子之间发生弹性碰撞，没有能量

　　b. 磷光：波长较长，寿命可达数秒至十秒，停止光照后会在短时间内发射，常在低

　　不同点：a. 红外较适合高分子侧基和端基，特别是一些极性基团的测定，而拉曼对研

　　b. 对具有对称中心的基团的非对称振动而言，红外是活性，而拉曼是非活性，

　　? 统一物质在相同条件下观察到的各种荧光，其波长相同，只是发光途径和寿命不同。

　　? 斯托克斯线：在拉曼散射中，若光子把一部分能量给样品分子，散射能量减少，此时

　　? 核磁共振：是通过将样品置于强磁场中，然后用射频元辐射样品，是具有磁矩的原

　　? 屏蔽效应：当原子核处于外磁场中时，核外电子运动产生感应磁场，就像形成一个

　　磁屏蔽，使外磁对原子核的作用减弱了，即实际作用在原子核上的磁场为H0(1-σ)，而不是H0，σ称为屏蔽常数

　　? 化学位移：共振发生变化，在谱图上反应为波峰位置的移动，称为化学位移 ? 磁各向异性效应（电子环流效应）：

　　核有自旋（核磁距）：自旋量子数I不等于零（质量数和原子序数不同为偶数） ? 外磁场，能级裂分

　　氢键：能使较低场发生共振。升温或稀释溶剂，高场移动，加入氘，消失 ? 溶剂效应：在氢谱测定中不能用带氢的溶剂，若必须测，用氘带试剂

　　分配色谱法：利用被分离组分在固定相和流动相中的溶解度差别而实现分离 ? 吸收色谱法：利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差别实现分离 ? 离子交换色谱法：利用被分离组分交换能力的差别而实现分离

　　XI=fi*Ai/∑（fi*Ai）XI为试样中组分， fi组分i的校正因子，Ai组分的峰面积 ? 内标法：当试样组分不能全部从色谱柱流出，或有些组分在检测器上没有信号

　　χi=EIAi/AE χi为试样中组分的质量分数 EI 为标准试样中组分i的含量

　　? DSC：示差扫描量热法。是使试样和参比物在程序升温或是降温的相同环境中，用

　　热量补偿器以增加电功率的方式，即对参比物或试样中温度低的一方给予热量的补偿，是两者的温差保持为零，测量所做的功，即试样的吸收热量变化量对温度（或时间）的依赖关系的的一种技术

　　? DTA：差热分析法。是参比物语等量试样在相同环境中等速变温的情况下相比较，

　　试样的任何化学和物理变化，和它处于同一环境中的标准物质比较，要出现暂时的增高或降低

　　? TG：热失重法。是在程序升温的环境中，测量试样的质量对温度（或时间）的依赖

　　? GPC：凝胶渗透色谱。也称为尺寸排除色谱，是一种液相色谱。基于体积排阻的分

　　平衡排除理论：大分子进入孔洞少，在孔内流经的路程也短，最先出来。 ? 限制扩散理论：分子质量高的样品，扩散速度小，流速大时，两相不能平衡 ? 流动分离理论：细长管子模型，大分子从中间流过，小分子粘附在管壁

　　什麽是仪器分析？一般的说，仪器分析是指采用比较复杂或特殊的仪器设备，通过测量物质的某些物理或物理化学性质的参数及其变化来获取物质的化学组成、成分含量及化学结构等信息的一类方法。这些方法一般都有独立的方法原理及理…

　　仪器分析总结问题1：色谱柱的分离机理主要包括哪两种？分配和吸附问题2：色谱柱分离的两个理论是什么？塔板理论和速率理论问题3：气相色谱中载气系统中净化器的作用是？提高载气纯度问题4：气相色谱中进样系统中气化室的作…

　　?仪器分析爆头总结?填空：PCR推导公式N=N0*（1+e）n次方，质谱分析仪的构造（进样系统，离子源，质量分析器，检测器），IE离子源，色谱法分为气相色谱法、液相色谱法，朗伯－比尔定律：朗伯光的吸收程度和吸收…

　　色谱法的原理：借在两相间分配原理而使混合物中各组分分离。气相色谱就是根据组分与固定相与流动相的亲和力不同而实现分离。组分在固定相与流动相之间不断进行溶解、挥发（气液色谱），或吸附、解吸过程而相互分离，然后进入检…

　　跃迁选择定则1在跃迁时，主量子数n的改变不受限制。2?L=±1，即跃迁只允许在S与P之间、或P与S或D之间，D与P或F之间产生等等。3?S=0。即不同多重态之间禁止跃迁。4?J=0，±1。但当J=0时，?J=0…

　　1.现代仪器分析：以物质10.散射光谱：分子吸收谱。电子，本身不产生吸收物发光：发生在生物体内统、磁场系统、探头、信的物理性质或物理化学辐射能后，有一部分电子原子发射光谱法AES峰，但与发色团相连时，有酶类物质…

　　根据IUPAC建议不属于分析方法的主要评价指标的是A精密度B准确度C灵敏度D检出限第三章紫外可见吸收光谱法填空题1对于紫外可见分光光度计一般在可见光区使用的是材质的棱镜和比色皿而在紫外区一般使用的是和光源必须用...

　　第五章高效液相色谱分析法53高效液相色谱分析法中常用哪些检测器各有什么特点哪些适合梯度淋洗答常用的检测器有l紫外检测器2荧光检测器3示差折光率检测器4电导检测器各检测器特点1紫外检测器应用最广对大部分有机化合物...

　　第2章气相色谱分析一选择题1在气相色谱分析中用于定性分析的参数是保留值保留值2在气相色谱分析中用于定量分析的参数是DA保留时间B保留体积C半峰宽D峰面积3使用热导池检测器时应选用下列哪种气体作载气其效果最好AA...

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